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实验动物饮用纯水机制无菌水的效果观察

[导读]随着生命科学的不断发展 , 人们对实验动物的质量要求也愈来愈高, 清洁级以上的实验动物使用量也随之增大。

随着生命科学的不断发展 , 人们对实验动物的质量要求也愈来愈高, 清洁级以上的实验动物使用量也随之增大。清洁级动物饮用水和屏障系统内环境卫生使用水也要求达到无菌状态 。当前对实验动物所需的无菌水一般采用高压灭菌(121 ℃, 30 min)和纯水机制取。前者高压消毒灭菌彻底, 但耗时耗电;后者制水取水方便, 但对其无菌效果心存忧虑 ,不敢大胆采用。为此, 我们对重庆颐洋企业发展有限公司生产的“艾科浦”牌实验动物饮用纯水机进行了无菌水的效果观察 。

1 材料和方法

1.1 实验动物饮用纯水机

型号 ADW-0040-C , 重庆颐洋企业发展有限公司。产水量为 40 L h , 纯水机放置在屏障系统外 ,以便于维修和操作, 其储水量为 200 L 的密闭储水桶放置在屏障系统内 , 纯水机与 储水桶以 PE 管穿墙连接 ,储水桶内置浸没式紫外灯 , 紫外灯 24 h 工作, 储水桶下部有一出水龙头, 供屏障内工作人员使用 。

1.2 培养基

营养琼脂 杭州微生物试剂有限公司, 批号20040805 。硫乙醇酸盐液体培养基 , 杭州微生物试剂有限公司 ,批号 20050428 。肉汤培养基, 北京奥博星生物技术责任有限公司 ,批号20010318 。

1.3 水样的采集[ 1]

以无菌操作方法进行, 将屏障内放置的纯水储水桶的水龙头用酒精灯烧灼消毒后, 将水龙头打开,放水5 min 后 , 用灭菌的三角瓶采集水样, 密闭备用 。

1.4 酸化水的配制

为防止实验动物感染绿脓杆菌等细菌等细菌,一般对清洁级以上的实验动物要求饮用酸化水 。本实验酸化水的配制在超净台内进行 。取部分水样,用盐酸将其调到 pH 3 。密闭备用 。

1.5 纯水的无菌检验

在超净台内用无菌吸管分别吸取 1 mL 检样 ,接种于肉汤培养基和硫乙醇酸盐液体培养基上。37 ℃、48 h ,进行需氧菌和厌氧菌的检验 。

1.6 细菌总数的测定[ 1]

无菌操作法用灭菌吸管吸取 1 mL 检样 ,注入无菌平皿中,再倾注约 15 mL 已融化并冷却到 45 ℃左右的营养琼脂培养基。立即旋摇平皿使检样与培养基充分混匀。每个检样应倾注两个平皿。于 37 ℃、24 h后取出计数 。

2 结果

2.1 无菌检测结果

为了观察纯水机的制水效果 , 我们对新购买的纯水机进行了一次性制水效果的检测, 按照纯水在储水桶中存放时间的不同, 进行了无菌检测 。其结果见表 1 。


2.2 存放不同时间的效果

为了观察纯水机制纯水存放效果 , 将纯水和经配制的酸化水取出后放置在无菌瓶中, 以不同存放时间取样 ,分别接种肉汤培养基和硫乙醇酸盐液体培养基,进行了需氧菌和厌氧菌的检验 , 以观察纯水 ,酸化水不同存放时间的无菌效果 ,见表 2 。


3 讨论与小结

从以上结果可以看出 , “艾科浦”牌纯水机的制水效果能达到无菌状态 。其制水原理为:自来水经过PP 纤维滤芯预处理过滤 ,以除去水中铁锈、泥沙等杂质 。再经过高效活性碳滤芯除去水中的余氯 、有机物等 。再经过反渗透(RO)处理, 此过程能滤除水中的细菌 、病毒、无机盐类等[ 2], 经超滤(UF)膜终端处理,可有效去除水中可能残存的微粒、悬浮物和细菌及热源等 。最后再利用波长为 254 nm 的紫外光杀菌,使细菌完全处于紫外光的照射下,可有效杀死细菌,使水达到无菌状态。

从表 1 结果可见, 纯水机一次性制纯水在储水桶中放置了 7 d 后 , 仍未检出细菌。同时我们还对纯水机每天定时制水情况进行了 1 ~ 7 d 无菌监测 ,仍未检出细菌, 说明机制纯水效果好,能达到屏障系统动物饮用的无菌水的要求。

从表 2 结果可知 ,机制的纯水和经加酸处理的酸化水(pH2 ~ 3),在无菌瓶中经过长达 30 d 的追踪观察,仍未检出细菌。因此 ,可以认为用纯水机制的纯水是可以给屏障系统的动物饮用和屏障内环境清洁卫生使用 。这与文献报道的“净化水经盐酸酸化,可达到无菌标准”一致[ 3]。在长期的使用过程, 建议定期(每月一次)清洗滤芯,每周定时监测,以保证屏障内实验动物饮用水的质量 。



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随着生命科学的不断发展 , 人们对实验动物的质量要求也愈来愈高, 清洁级以上的实验动物使用量也随之增大。清洁级动物饮用水和屏障系统内环境卫生使用水也要求达到无菌状态 。当前对实验动物所需的无菌水一般采用高压灭菌(121 ℃, 30 min)和纯水机制取。前者高压消毒灭菌彻底, 但耗时耗电;后者制水取水方便, 但对其无菌效果心存忧虑 ,不敢大胆采用。为此, 我们对重庆颐洋企业发展有限公司生产的“艾科浦”牌实验动物饮用纯水机进行了无菌水的效果观察 。

1 材料和方法

1.1 实验动物饮用纯水机

型号 ADW-0040-C , 重庆颐洋企业发展有限公司。产水量为 40 L h , 纯水机放置在屏障系统外 ,以便于维修和操作, 其储水量为 200 L 的密闭储水桶放置在屏障系统内 , 纯水机与 储水桶以 PE 管穿墙连接 ,储水桶内置浸没式紫外灯 , 紫外灯 24 h 工作, 储水桶下部有一出水龙头, 供屏障内工作人员使用 。

1.2 培养基

营养琼脂 杭州微生物试剂有限公司, 批号20040805 。硫乙醇酸盐液体培养基 , 杭州微生物试剂有限公司 ,批号 20050428 。肉汤培养基, 北京奥博星生物技术责任有限公司 ,批号20010318 。

1.3 水样的采集[ 1]

以无菌操作方法进行, 将屏障内放置的纯水储水桶的水龙头用酒精灯烧灼消毒后, 将水龙头打开,放水5 min 后 , 用灭菌的三角瓶采集水样, 密闭备用 。

1.4 酸化水的配制

为防止实验动物感染绿脓杆菌等细菌等细菌,一般对清洁级以上的实验动物要求饮用酸化水 。本实验酸化水的配制在超净台内进行 。取部分水样,用盐酸将其调到 pH 3 。密闭备用 。

1.5 纯水的无菌检验

在超净台内用无菌吸管分别吸取 1 mL 检样 ,接种于肉汤培养基和硫乙醇酸盐液体培养基上。37 ℃、48 h ,进行需氧菌和厌氧菌的检验 。

1.6 细菌总数的测定[ 1]

无菌操作法用灭菌吸管吸取 1 mL 检样 ,注入无菌平皿中,再倾注约 15 mL 已融化并冷却到 45 ℃左右的营养琼脂培养基。立即旋摇平皿使检样与培养基充分混匀。每个检样应倾注两个平皿。于 37 ℃、24 h后取出计数 。

2 结果

2.1 无菌检测结果

为了观察纯水机的制水效果 , 我们对新购买的纯水机进行了一次性制水效果的检测, 按照纯水在储水桶中存放时间的不同, 进行了无菌检测 。其结果见表 1 。

2.2 存放不同时间的效果

为了观察纯水机制纯水存放效果 , 将纯水和经配制的酸化水取出后放置在无菌瓶中, 以不同存放时间取样 ,分别接种肉汤培养基和硫乙醇酸盐液体培养基,进行了需氧菌和厌氧菌的检验 , 以观察纯水 ,酸化水不同存放时间的无菌效果 ,见表 2 。

3 讨论与小结

从以上结果可以看出 , “艾科浦”牌纯水机的制水效果能达到无菌状态 。其制水原理为:自来水经过PP 纤维滤芯预处理过滤 ,以除去水中铁锈、泥沙等杂质 。再经过高效活性碳滤芯除去水中的余氯 、有机物等 。再经过反渗透(RO)处理, 此过程能滤除水中的细菌 、病毒、无机盐类等[ 2], 经超滤(UF)膜终端处理,可有效去除水中可能残存的微粒、悬浮物和细菌及热源等 。最后再利用波长为 254 nm 的紫外光杀菌,使细菌完全处于紫外光的照射下,可有效杀死细菌,使水达到无菌状态。

从表 1 结果可见, 纯水机一次性制纯水在储水桶中放置了 7 d 后 , 仍未检出细菌。同时我们还对纯水机每天定时制水情况进行了 1 ~ 7 d 无菌监测 ,仍未检出细菌, 说明机制纯水效果好,能达到屏障系统动物饮用的无菌水的要求。

从表 2 结果可知 ,机制的纯水和经加酸处理的酸化水(pH2 ~ 3),在无菌瓶中经过长达 30 d 的追踪观察,仍未检出细菌。因此 ,可以认为用纯水机制的纯水是可以给屏障系统的动物饮用和屏障内环境清洁卫生使用 。这与文献报道的“净化水经盐酸酸化,可达到无菌标准”一致[ 3]。在长期的使用过程, 建议定期(每月一次)清洗滤芯,每周定时监测,以保证屏障内实验动物饮用水的质量 。

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